摘要

2025年版《中國(guó)藥典》四部首次將甘露醇作為藥用輔料納入標(biāo)準(zhǔn)體系，并對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行了重大升級(jí)。在甘露醇的【有關(guān)物質(zhì)】檢查與【含量測(cè)定】項(xiàng)目中，藥典明確指定使用“磺化交聯(lián)的苯乙烯-二乙烯苯共聚物為填充劑的強(qiáng)陽離子鈣型交換柱"進(jìn)行高效液相色譜分析。這一方法升級(jí)從傳統(tǒng)滴定法跨越至色譜法，對(duì)色譜柱的選擇與使用提出了明確的技術(shù)要求。本文基于2025年版藥典標(biāo)準(zhǔn)，系統(tǒng)解讀甘露醇檢測(cè)對(duì)色譜柱的特定要求、分離機(jī)制、典型色譜條件及關(guān)鍵注意事項(xiàng)，旨在為制藥企業(yè)和檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供實(shí)用的技術(shù)參考。

關(guān)鍵詞：2025年版《中國(guó)藥典》；甘露醇；強(qiáng)陽離子鈣型交換柱；SimpSil Sugar-Ca；糖醇分離；有關(guān)物質(zhì)

1 引言

甘露醇（Mannitol）是一種六碳糖醇，在制藥領(lǐng)域應(yīng)用廣泛：作為滲透性利尿劑用于治療腦水腫、青光眼；作為藥用輔料用作片劑稀釋劑、凍干賦形劑、甜味劑等。然而，甘露醇及其相關(guān)物質(zhì)（如山梨醇、麥芽糖醇、異麥芽酮糖醇）均為結(jié)構(gòu)高度相似的糖醇類化合物，極性強(qiáng)、無紫外吸收，給分離分析帶來了技術(shù)挑戰(zhàn)。

2025年版《中國(guó)藥典》四部首次將甘露醇作為藥用輔料納入標(biāo)準(zhǔn)，在【有關(guān)物質(zhì)】檢查和【含量測(cè)定】項(xiàng)目中，明確規(guī)定采用高效液相色譜法，并指定了專用的色譜柱類型。這一方法升級(jí)從傳統(tǒng)的滴定法跨越至色譜法，實(shí)現(xiàn)了對(duì)已知雜質(zhì)（山梨醇、麥芽糖醇、異麥芽酮糖醇）的精準(zhǔn)控制，標(biāo)志著我國(guó)甘露醇質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正式與國(guó)際主流藥典（USP、EP、JP）接軌。

本文聚焦于甘露醇檢測(cè)專用色譜柱的選擇與應(yīng)用，從分離機(jī)制、典型色譜條件、系統(tǒng)適用性要求及常見問題等方面進(jìn)行系統(tǒng)解讀。

2 色譜柱的技術(shù)要求

2.1 藥典規(guī)定的色譜柱類型

根據(jù)2025年版《中國(guó)藥典》四部規(guī)定，甘露醇【有關(guān)物質(zhì)】檢查與【含量測(cè)定】項(xiàng)目使用的色譜柱為：

用磺化交聯(lián)的苯乙烯-二乙烯苯共聚物為填充劑的強(qiáng)陽離子鈣型交換柱（推薦規(guī)格：7.8mm×300mm，或分離效能相當(dāng)?shù)纳V柱）

這一描述包含了三個(gè)關(guān)鍵技術(shù)特征：

（1）基質(zhì)材料：磺化交聯(lián)的苯乙烯-二乙烯苯共聚物

這是一種高分子聚合物基質(zhì)，相較于硅膠基質(zhì)，具有以下優(yōu)勢(shì)：

·         pH耐受范圍寬：可耐受極端pH條件

·         化學(xué)穩(wěn)定性好：不易發(fā)生不可逆吸附

·         耐高溫：可在80℃以上高溫運(yùn)行

（2）功能基團(tuán)：強(qiáng)陽離子交換基團(tuán)（磺酸基）

磺酸基作為強(qiáng)陽離子交換位點(diǎn)，能夠與糖醇分子中的羥基發(fā)生配位相互作用，這是實(shí)現(xiàn)糖醇類化合物選擇性分離的關(guān)鍵。

（3）反離子類型：鈣型（Ca2?）

鈣型是糖醇分離的經(jīng)典選擇。Ca2?作為配位離子，與糖醇羥基形成配位鍵，不同糖醇因羥基空間構(gòu)型差異而產(chǎn)生保留時(shí)間差異，從而實(shí)現(xiàn)分離。

2.2 典型色譜柱型號(hào)：SimpSil Sugar-Ca

在實(shí)際應(yīng)用中，SimpSil Sugar-Ca色譜柱是被驗(yàn)證符合藥典要求的典型色譜柱。其規(guī)格參數(shù)如下：

該色譜柱的分離機(jī)制基于配體交換色譜原理：

·         離子交換作用：Ca2?作為配位中心，與糖醇羥基形成配位鍵

·         尺寸排阻作用：根據(jù)分子大小進(jìn)行分離

·         疏水相互作用：苯乙烯骨架提供疏水保留

2.3 替代色譜柱的考慮

藥典規(guī)定允許使用“分離效能相當(dāng)?shù)纳V柱"。選擇替代色譜柱時(shí)，需滿足以下條件：

·         采用相同分離原理（磺化交聯(lián)苯乙烯-二乙烯苯共聚物、Ca2?型）

·         色譜柱規(guī)格相近（內(nèi)徑7.8~8.0mm，長(zhǎng)度250~300mm）

·         系統(tǒng)適用性試驗(yàn)完全符合藥典要求

3 典型色譜條件與分離效果

3.1 藥典規(guī)定的色譜條件

根據(jù)2025年版藥典，甘露醇檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)色譜條件如下：

3.2 典型色譜圖與分離效果

采用SimpSil Sugar-Ca色譜柱，在標(biāo)準(zhǔn)條件下分析，可獲得以下分離效果：

系統(tǒng)適用性溶液（1）：甘露醇與山梨醇各約25 mg/mL

·         甘露醇峰與山梨醇峰的分離度 > 2.0（藥典要求）

·         出峰順序：甘露醇先出峰，山梨醇后出峰

系統(tǒng)適用性溶液（2）：麥芽糖醇與異麥芽酮糖醇各約1.0 mg/mL

·         麥芽糖醇和異麥芽酮糖醇第一個(gè)色譜峰的分離度 ≥ 1.5

·         注：異麥芽酮糖醇通常表現(xiàn)為雙峰（α和β異構(gòu)體），第二個(gè)峰可能與麥芽糖醇重合。

3.3 分離機(jī)制解釋

Ca2?型配體交換柱對(duì)糖醇的分離基于以下原理：

糖醇分子中的羥基與色譜柱固定相上的Ca2?形成配位絡(luò)合物。不同糖醇因羥基的空間構(gòu)型不同（赤道鍵/軸向鍵的比例），與Ca2?的配位能力存在差異：

·         配位能力強(qiáng)的糖醇：保留時(shí)間長(zhǎng)，出峰晚（如山梨醇）

·         配位能力弱的糖醇：保留時(shí)間短，出峰早（如甘露醇）

這一機(jī)制使得甘露醇與其異構(gòu)體山梨醇得以有效分離，分離度可達(dá)2.0以上。

4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要點(diǎn)

2025年版藥典對(duì)甘露醇檢測(cè)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)提出了明確要求，需配制三組溶液進(jìn)行驗(yàn)證：

4.1 系統(tǒng)適用性溶液（1）

·         組成：甘露醇與山梨醇各約25 mg/mL

·         驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：甘露醇峰與山梨醇峰的分離度 > 2.0

·         目的：驗(yàn)證色譜柱對(duì)甘露醇及其主要異構(gòu)體的分離能力

4.2 系統(tǒng)適用性溶液（2）

·         組成：麥芽糖醇和異麥芽酮糖醇各約1.0 mg/mL

·         驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：麥芽糖醇和異麥芽酮糖醇第一個(gè)色譜峰的分離度符合要求（≥1.5）

·         目的：驗(yàn)證色譜柱對(duì)新型已知雜質(zhì)的分離能力

·         注：異麥芽酮糖醇通常有兩個(gè)色譜峰（α和β端基異構(gòu)體），第二個(gè)色譜峰可能會(huì)與麥芽糖醇峰重合。

4.3 系統(tǒng)適用性溶液（3）

·         組成：對(duì)照溶液稀釋40倍

·         目的：用于確定雜質(zhì)峰的忽略限度（0.10%）

·         驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：用于計(jì)算其他單個(gè)未知雜質(zhì)的限度

4.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的操作流程

建議在每批樣品分析前按以下流程完成系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：

1.      平衡色譜柱至基線穩(wěn)定（通常需要30~60分鐘）

2.      進(jìn)樣系統(tǒng)適用性溶液（1），確認(rèn)分離度 > 2.0

3.      進(jìn)樣系統(tǒng)適用性溶液（2），確認(rèn)分離度符合要求

4.      進(jìn)樣系統(tǒng)適用性溶液（3），確認(rèn)靈敏度滿足要求

5.      方可進(jìn)行供試品溶液分析

5 色譜柱使用與維護(hù)要點(diǎn)

5.1 色譜柱的安裝與平衡

由于Ca2?型配體交換柱具有特殊性，安裝與平衡需注意：

·         流動(dòng)相：僅使用純水（HPLC級(jí)），無需添加任何緩沖鹽或有機(jī)溶劑

·         脫氣：純水流動(dòng)相必須充分脫氣，防止氣泡進(jìn)入色譜柱

·         平衡時(shí)間：新色譜柱需要較長(zhǎng)的平衡時(shí)間（1~2小時(shí)），直至RI檢測(cè)器基線穩(wěn)定

·         流速程序：建議采用梯度流速平衡：0.2→0.3→0.5 mL/min逐步升至工作流速

5.2 高溫運(yùn)行的注意事項(xiàng)

藥典規(guī)定柱溫為80℃，高溫運(yùn)行需注意：

·         色譜柱耐溫確認(rèn)：使用前確認(rèn)色譜柱的最高耐溫范圍（SimpSil Sugar-Ca可耐受80℃以上）

·         柱溫箱穩(wěn)定性：確保柱溫箱控溫精度（建議±0.5℃以內(nèi)）

·         流動(dòng)相預(yù)熱：流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱前應(yīng)預(yù)熱至接近柱溫，避免熱沖擊

·         檢測(cè)器溫度：RI檢測(cè)器溫度應(yīng)穩(wěn)定在40~55℃之間，與環(huán)境溫度的溫差影響基線穩(wěn)定

5.3 色譜柱的保護(hù)與再生

日常維護(hù)：

·         使用0.45μm濾膜過濾流動(dòng)相和樣品

·         每批樣品結(jié)束后用純水以0.2 mL/min低速?zèng)_洗30分鐘

·         長(zhǎng)期保存：用純水充滿色譜柱，兩端密封，室溫保存

污染再生：

·         如出現(xiàn)柱壓升高或分離度下降，可嘗試用0.1% EDTA溶液低速?zèng)_洗（2~3小時(shí)），再用純水充分沖洗

·         注意：Ca2?型柱不宜使用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿再生，可能導(dǎo)致Ca2?流失

5.4 RI檢測(cè)器的使用注意事項(xiàng)

示差折光檢測(cè)器（RI）對(duì)溫度和環(huán)境非常敏感：

·         恒溫環(huán)境：檢測(cè)器應(yīng)置于溫度波動(dòng)小于±1℃的環(huán)境中

·         平衡時(shí)間：開機(jī)后需等待檢測(cè)器溫度穩(wěn)定（通常需要1~2小時(shí)）

·         參比池：確保參比池充滿流動(dòng)相，無氣泡

·         吹掃：分析前用流動(dòng)相充分吹掃檢測(cè)池

5.5 常見問題與解決方案

6 新舊藥典色譜條件的對(duì)比

2025年版藥典與2020年版在色譜條件上的主要差異如下：

這一升級(jí)的核心變化在于引入了對(duì)已知雜質(zhì)的精準(zhǔn)控制，與國(guó)際藥典要求一致。

7 結(jié)語

2025年版《中國(guó)藥典》將甘露醇納入四部藥用輔料標(biāo)準(zhǔn)體系，檢測(cè)方法從滴定法升級(jí)為高效液相色譜法，這是我國(guó)藥用輔料質(zhì)量監(jiān)管的重要進(jìn)步。在這一升級(jí)中，色譜柱的選擇與應(yīng)用成為方法成功實(shí)施的關(guān)鍵。

核心要點(diǎn)回顧：

1.      色譜柱類型：磺化交聯(lián)的苯乙烯-二乙烯苯共聚物為填充劑的強(qiáng)陽離子鈣型交換柱（如SimpSil Sugar-Ca）

2.      分離機(jī)制：Ca2?配體交換色譜，基于糖醇羥基與Ca2?配位能力差異實(shí)現(xiàn)分離

3.      關(guān)鍵條件：純水流動(dòng)相、0.5 mL/min流速、80℃柱溫、RI檢測(cè)

4.      系統(tǒng)適用性：三組溶液驗(yàn)證，甘露醇-山梨醇分離度>2.0，麥芽糖醇-異麥芽酮糖醇分離度≥1.5

對(duì)于制藥企業(yè)和檢測(cè)機(jī)構(gòu)而言，建議：

·         嚴(yán)格按照藥典要求選擇色譜柱，優(yōu)先采用已驗(yàn)證的型號(hào)

·         建立規(guī)范的色譜柱使用與維護(hù)SOP，確保方法重現(xiàn)性

·         關(guān)注系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的完整性，不可簡(jiǎn)化

·         定期評(píng)估色譜柱性能，及時(shí)更換柱效下降的色譜柱

隨著2025年版藥典的實(shí)施，甘露醇檢測(cè)專用色譜柱的應(yīng)用將更加廣泛，掌握其技術(shù)要點(diǎn)對(duì)于保障藥品質(zhì)量安全具有重要意義。