免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的桔青毒素，從而對樣品起到非常針對性的凈化作用，過柱凈化后的樣品液可直接用于HPLC分析或處理后用熒光光度計檢測。

SimplyLab桔青霉素免疫親和柱測定的基礎是抗原-抗體反應，抗體連接在柱體內，樣品中的桔青霉素素經過提取、過濾、稀釋，然后緩慢的通過桔青霉素免疫親和柱，在免疫親和柱內毒素與抗體結合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他無關物質。用甲醇洗脫桔青霉素，然后注入到分析儀器中用于檢測。

樣品處理：

方法一：適用于玉米、大米等糧食作物。

----10g±0.01g樣品（固體樣品需粉碎，并過1mm分樣篩）加入50mL提取液（70%甲醇-水溶液）混勻；

----高速均質（≥10,000r/min）1min，或搖床（200r/min～300r/min）劇烈振蕩20min，用快速定性濾紙過濾，收集濾液或者離心機（8,000r/min）離心10min，取上清液備用；

----取5mL上清液（或濾液）加入35mL磷酸溶液（6.3）稀釋，搖勻作為上樣液備用；

----取20mL上樣液過免疫親和柱凈化。

稀釋倍數：2

方法二：適用于紅曲及其制品

----1g±0.01g樣品（固體樣品需粉碎，并過1mm分樣篩）加入20mL提取液（70%甲醇-水溶液）混勻；

----高速均質（≥10,000r/min）1min，或搖床（200r/min～300r/min）劇烈振蕩20min，用快速定性濾紙過濾，收集濾液或離心機（8,000r/min）離心10min，收集上清液；

----取1mL濾液或上清液0.1%PBST溶液39mL稀釋，搖勻作為上樣液；

----取10mL上樣液過免疫親和柱凈化。

稀釋倍數：80

SimplyLab桔青霉素免疫親和柱的操作程序：

----取出免疫親和柱，將注射器筒的下端直接穿透親和柱上方的塞子，完成注射器筒與親和柱的連接，將其放置在氣控操作架上進行固定；

----取適量步驟7中處理后的溶液，注入到注射器筒中；

----去掉親和柱下方堵頭，調節開關，使液體以1～2滴/秒的速度流出；

----待液體排干后，凈化樣品為糧食類時，加入5mL磷酸溶液（6.3）洗滌，流速1～2滴/秒；

----待液體排干后，凈化樣品為紅曲及其制品時，加入10mL 0.1%PBST（6.4）洗滌，流速1～2滴/秒；

采用HPLC分析時，按以下步驟操作：

洗脫方法：

----待液體排干后，用2mL甲醇洗脫，流速1滴/秒，收集洗脫液；

----洗脫液用0.22μm微孔濾器過濾后轉移至樣品瓶用于HPLC分析。

*每次上樣前都要將上次液體完全排干。