免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的桔青毒素，從而對(duì)樣品起到非常針對(duì)性的凈化作用，過(guò)柱凈化后的樣品液可直接用于HPLC分析或處理后用熒光光度計(jì)檢測(cè)。

SimplyLab桔青霉素免疫親和柱測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原-抗體反應(yīng)，抗體連接在柱體內(nèi)，樣品中的桔青霉素素經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋，然后緩慢的通過(guò)桔青霉素免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫桔青霉素，然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。

樣品處理：

方法一：適用于玉米、大米等糧食作物。

----10g±0.01g樣品（固體樣品需粉碎，并過(guò)1mm分樣篩）加入50mL提取液（70%甲醇-水溶液）混勻；

----高速均質(zhì)（≥10,000r/min）1min，或搖床（200r/min～300r/min）劇烈振蕩20min，用快速定性濾紙過(guò)濾，收集濾液或者離心機(jī)（8,000r/min）離心10min，取上清液備用；

----取5mL上清液（或?yàn)V液）加入35mL磷酸溶液（6.3）稀釋，搖勻作為上樣液備用；

----取20mL上樣液過(guò)免疫親和柱凈化。

稀釋倍數(shù)：2

方法二：適用于紅曲及其制品

----1g±0.01g樣品（固體樣品需粉碎，并過(guò)1mm分樣篩）加入20mL提取液（70%甲醇-水溶液）混勻；

----高速均質(zhì)（≥10,000r/min）1min，或搖床（200r/min～300r/min）劇烈振蕩20min，用快速定性濾紙過(guò)濾，收集濾液或離心機(jī)（8,000r/min）離心10min，收集上清液；

----取1mL濾液或上清液0.1%PBST溶液39mL稀釋，搖勻作為上樣液；

----取10mL上樣液過(guò)免疫親和柱凈化。

稀釋倍數(shù)：80

SimplyLab桔青霉素免疫親和柱的操作程序：

----取出免疫親和柱，將注射器筒的下端直接穿透親和柱上方的塞子，完成注射器筒與親和柱的連接，將其放置在氣控操作架上進(jìn)行固定；

----取適量步驟7中處理后的溶液，注入到注射器筒中；

----去掉親和柱下方堵頭，調(diào)節(jié)開關(guān)，使液體以1～2滴/秒的速度流出；

----待液體排干后，凈化樣品為糧食類時(shí)，加入5mL磷酸溶液（6.3）洗滌，流速1～2滴/秒；

----待液體排干后，凈化樣品為紅曲及其制品時(shí)，加入10mL 0.1%PBST（6.4）洗滌，流速1～2滴/秒；

采用HPLC分析時(shí)，按以下步驟操作：

洗脫方法：

----待液體排干后，用2mL甲醇洗脫，流速1滴/秒，收集洗脫液；

----洗脫液用0.22μm微孔濾器過(guò)濾后轉(zhuǎn)移至樣品瓶用于HPLC分析。

*每次上樣前都要將上次液體完全排干。